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雷竞技下载官方版 Phygene RIPA裂解液(中) RIPA Lysis Buffer (Medium)

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信息简介:雷竞技下载官方版 Phygene RIPA裂解液(中) RIPA Lysis Buffer (Medium)

详细信息:
“雷竞技下载官方版 Phygene RIPA裂解液(中) RIPA Lysis Buffer (Medium)”参数说明
是否有现货:
认证:
雷竞技下载官方版 Phygene
级别:
超纯、高纯
用途:
实验室
含量:
标准品
应用:
科学研究
型号:
PH0317
规格:
100ml
商标:
雷竞技下载官方版 Phygene
包装:
产量:
3565
“雷竞技下载官方版 Phygene RIPA裂解液(中) RIPA Lysis Buffer (Medium)”详细介绍
产品简介:

RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer),其本意是Radio Immunoprecipitation Assay,是一种传统的细胞组织快速裂解液,对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有裂解作用。根据其裂解液的强度不同,大致可以分为强、中、弱三类。

本品属于裂解强度居中的RIPA裂解液,含有sodium orthovanadate,sodium fluoride,EDTA,leupeptin等多种抑制剂,可以有效抑制蛋白降解。裂解得到的蛋白样品可用于常规的Western、IP等实验。
使用说明:

(一) 细胞样品

1)融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。

2)贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液清洗细胞一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照6孔板每孔加入μl 裂解液的比例加入裂解液。用*吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后,细胞就会被裂解。

悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入μl 裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成5×105~1×106个细胞/管,然后再裂解。

3)充分裂解后,g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

裂解液用量说明:通常6孔板每孔细胞加入150μl裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200μl或250μl。

(二)组织样品:

1)把组织剪切成细小的碎片。

2)融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。

3)按照每20mg组织加入μl裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。)

4)用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。

5)充分裂解后,g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

6)如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得充分。

【注】:RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下,可以直接离心取上清用于后续实验;如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物,随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子,例如NF-kappaB、p53等时,通常不必进行超声处理,就可以检测到这些转录因子。
注意事项:

1)需自备PMSF。

2)裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

3) 用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品,可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定其蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂,不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

*Important Note:?This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.

我们所提供的产品仅供科研使用,不得用于临床诊断、治疗、食品或者化妆品等用途!